巨大芽孢杆菌细胞色素P450酶的表达纯化及定向进化研究

• 作者: 李迅 王亮亮 王婷 王飞
• 来源期刊: 林产化学与工业
• 学科: 工学
• 关键词: 巨大芽孢杆菌 细胞色素P450酶 定向进化 软脂酸 油酸
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 135-140
• 页数: 6页
• 分类号: TQ35|Q556|Q786
• 字数: 4348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-2417.2014.06.022

摘要

为了获得高效的重组来自巨大芽孢杆菌ALA2的细胞色素P450酶( CYPs),将CYPs基因(cyp)克隆到大肠杆菌表达载体pET20b(含T7启动子)和pTrc99A(含trc启动子)中,转入大肠杆菌表达,发现trc启动子更适合CYPs的表达。优化了Ni-NTA纯化CYPs的条件,在pH值8.1时,用60 mmol/L的咪唑缓冲液洗脱得到电泳纯的重组CYPs,酶活达到2095 U/mg,纯化回收率为31%,回收倍数为2.32。通过理性设计确定突变位点为269位苏氨酸(T)和394位苯丙氨酸(F),通过筛选获得了突变酶T269S和T269R,2种突变酶以软脂酸为底物,酶活提高32.0%和29.0%,以油酸为底物酶活提高11.6%和9.1%。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王飞	南京林业大学化学工程学院	45	244	10.0	13.0
2	李迅	南京林业大学化学工程学院	25	149	6.0	11.0
3	王婷	南京林业大学化学工程学院	11	25	3.0	4.0
4	王亮亮	南京林业大学化学工程学院	2	5	1.0	2.0