蓖麻种子cDNA-AFLP反应体系的优化

• 作者: 包春光 吴春桃 张智勇 张现世 李国瑞 王文跃 陈晓凤 黄凤兰
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蓖麻 脂肪酸 cDNA-AFLP
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 页码范围: 74-80
• 页数: 7页
• 分类号: S565.6
• 字数: 4583字
• 语种: 中文

摘要

以蓖麻种子为研究对象,优化其cDNA-AFLP反应体系,为研究不同蓖麻材料或不同发育阶段的蓖麻种子内脂肪酸基因表达差异奠定理论基础。试验结果表明：提取蓖麻种子总RNA；将RNA逆转录为cDNA,用高频限制性内切酶EcoR Ⅰ和Mse Ⅰ进行酶切,并与EcoR Ⅰ、Mse Ⅰ接头连接,得到连接产物；连接产物稀释40倍作为预扩增模板,进行预扩增；优化选择性扩增反应体系,得到最佳反应体系为：10× PCR Buffer 2.0μL、dNTPs(10 mmol/L)1.4μL、Mg2+(25 mmol/L)1.4μL、模板稀释80倍1.0μL、Ex扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、My扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、LA Taq(5 U/μL)0.2μL、ddH2 O 11.6μL。采用优化后的体系,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对256对选择性引物进行筛选,得到适合蓖麻种子cDNA-AFLP分析的选择性扩增引物10对。