猪鼻支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

• 作者: 冯志新 刘茂军 熊祺琰 白方方 纪燕 邵国青 韦艳娜 马庆红
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪鼻支原体 黏附 间接免疫荧光技术
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 239-243
• 页数: 5页
• 分类号: R375
• 字数: 2712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.03.004

摘要

目的 猪鼻支原体是临床猪场的常见病菌,可引起猪多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、中耳炎等慢性炎症,同时其与多种人类肿瘤有明显相关性,但其致病机理有待深入,其感染细胞机制的研究尚未明确,因此,本研究欲建立一种用间接免疫荧光技术检测猪鼻支原体黏附宿主细胞的方法.方法 以猪鼻支原体和猪肾上皮细胞为研究对象,以兔抗猪鼻支原体纯化抗体为一抗,以FITC标记的羊抗兔IgG为二抗,通过反应条件的优化,建立猪鼻支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法(IFA).结果 最终确定最小黏附滴度为1∶107 CCU/mL,猪鼻支原体黏附PK15所需时间为6 h以上,一抗的最佳工作浓度为1∶100,二抗的最佳工作浓度为1∶1 600.结论表明间接免疫荧光技术可以用来检测猪鼻支原体对宿主细胞的黏附作用.为猪鼻支原体的研究特别是感染细胞机制的体外研究提供基础方法,同时为疾病的诊断及疫苗的研发奠定基础.