内质网应激时重组腺病毒Ad-PERK siRNA对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响

• 作者: 伍志盟 夏飞 李美玲 邓莉 郭风劲
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 骨肿瘤 腺病毒科 细胞增殖 细胞凋亡 PERK 内质网应激
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 996-1004
• 页数: 9页
• 分类号: R738.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.11.371

摘要

目的:探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒在内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)时对人软骨肉瘤SW1353细胞增殖和凋亡的影响.方法:构建靶向PERK基因的siRNA重组腺病毒Ad-PERKsiRNA,并将其感染SW1353细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测SW1353细胞中PERK mRNA和蛋白的表达.应用衣霉素(tunicamycin,TM)建立ERS模型;在ERS状态下,MTT法检测Ad-PERKsiRNA感染后SW1353细胞的增殖情况,FCM法检测感染后SW1353细胞的细胞周期和细胞凋亡率,透射电子显微镜下观察感染后SW1353细胞超微结构的变化,蛋白质印迹法检测感染后SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-Jun-N-terminal kinase,p-JNK)蛋白的表达.结果:成功构建获得重组腺病毒AdPERKsiRNA.Ad-PERK siRNA感染后,SW1353细胞中PERK mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).在ERS状态下,Ad-PERKsiRNA可促进SW1353细胞的增殖(P＜0.05),Ad-PERK siRNA感染组S期细胞所占比例高于感染空载体腺病毒Ad-RFP的阴性对照组和未感染的空白对照组(P＜0.05),Ad-PERK siRNA感染组SW1353细胞的凋亡率低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),透射电子显微镜下观察发现阴性对照组和空白对照组SW1353细胞存在明显的凋亡,Ad-PERK siRNA感染组SW1353细胞中cleaved caspase 3、caspase 12、CHOP和p-JNK蛋白的表达水平均明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论:重组腺病毒Ad-PERKsiRNA可以促进ERS状态下SW1353细胞的增殖,并抑制其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭风劲		36	142	7.0	11.0
2	李美玲		7	50	1.0	7.0
3	夏飞		2	0	0.0	0.0
4	邓莉		5	31	2.0	5.0
5	伍志盟		3	2	1.0	1.0