条斑紫菜叶状体DNA的高效制备

• 作者: 孔凡娜 张晓楠 徐奎鹏 李超 田知海 茅云翔
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 生物样品均质器 条斑紫菜 DNA制备
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 45-51
• 页数: 7页
• 分类号: Q349+.53
• 字数: 6230字
• 语种: 中文

摘要

探索优化研磨条斑紫菜叶状体提取DNA的条件,建立一套简单、快速、高效的高通量研磨破碎方法.钢珠研磨80 s时的破碎效果与液氮研磨破碎效果相近,因此选用80 s作为研磨时间.利用2种样品材料(干燥和新鲜)、4种研磨介质(钢珠φ2.3 mrn、陶瓷珠φ1 mm、石英砂0.270～0.707mm和玻璃珠Φ0.5 mm)、3个研磨介质体积梯度(0.1、0.2和0.3mE)设计研磨实验.结果发现,钢珠的破碎效果最好,玻璃珠的破碎效果最差;石英砂和玻璃珠组研磨干燥材料所得DNA完整性最好,4种研磨介质研磨新鲜材料所得DNA出现了降解,钢珠和陶瓷珠研磨干燥材料所得DNA降解最严重;研磨介质的体积对样品的破碎程度、DNA得率和DNA质量没有显著性影响;4种研磨介质研磨干燥和新鲜材料所提DNA的纯度均较高.80 s的研磨实验中显示,钢珠组能有效的破碎干燥和新鲜材料,获得DNA的纯度和得率都比较高,但是DNA出现了降解.在此基础上设置了0.2mL钢珠研磨干燥和新鲜材料5～40 s的时间梯度.实验结果显示,钢珠在5～40 s时均能有效的破碎干燥、新鲜2种样品材料.干燥材料研磨5～40 s时,DNA有明显的主条带,DNA得率随着研磨时间的延长有所增加,DNA质量较好,且能用于限制性内切酶酶切实验;新鲜材料研磨5～40 s时,DNA有明显的主条带,DNA得率没有显著性差异,DNA质量较好,也能用于限制性内切酶酶切实验.所以本文认为破碎干燥和新鲜2种样品材料制备高质量条斑紫菜DNA的最佳条件为:研磨介质为0.2mL钢珠、研磨速度为6 800 r/min、研磨时间为5s.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	茅云翔	中国海洋大学海洋生命学院	39	535	10.0	22.0
2	孔凡娜	中国海洋大学海洋生命学院	16	111	7.0	10.0
3	李超	中国海洋大学海洋生命学院	30	155	8.0	12.0
4	田知海	中国海洋大学海洋生命学院	1	1	1.0	1.0
5	张晓楠	中国海洋大学海洋生命学院	1	1	1.0	1.0
6	徐奎鹏	中国海洋大学海洋生命学院	1	1	1.0	1.0