甘蔗苏氨酸脱氨酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 张玉叶 罗俊 肖新换 苏炜华 阙友雄 黄宁
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗 苏氨酸脱氨酶基因 电子克隆 生物信息学 表达分析
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 59-67
• 页数: 9页
• 分类号: S566.1
• 字数: 5617字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.01.011

摘要

应用电子克隆技术,以烟草AAG59585序列为探针,获得了甘蔗苏氨酸脱氨酶(threonine deaminase)基因的全长cDNA,命名为Sc TD.经RT-PCR扩增和验证,该基因序列与电子克隆结果一致性高达99％.序列分析结果表明:Sc TD基因全长2 120 bp,具有完整的开放阅读框(ORF,164～1 681 bp),编码505个氨基酸,该基因编码蛋白定位于微体,为可溶性蛋白,不存在信号肽,二级结构原件多为α-螺旋,含有多个保守功能域,主要在氨基酸合成中发挥作用.电子表达分析结果显示,该基因在甘蔗根尖、根颈、花序、叶片、全株、芽和茎中组成型表达,其中在花序和根中的表达量最高.荧光定量PCR结果分析表明:该基因在甘蔗各组织中均有表达,且在根中的表达量最高.此外,该基因的表达受水杨酸胁迫后表达量最高,约为对照组的43.16倍,其次为聚乙二醇和茉莉酸甲酯,分别为6.90倍和4.40倍,推测该基因的表达与甘蔗抗病虫和抗渗透胁迫有关.此结果为甘蔗ScTD基因的克隆和功能验证以及在甘蔗基因工程中的应用奠定基础.