罗非鱼无乳链球菌C5a肽酶（ScpB）的原核表达及其免疫原性

• 作者: 刘志刚 卢迈新 可小丽 朱华平 李庆勇 高风英
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 罗非鱼 无乳链球菌 C5a肽酶 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 169-179
• 页数: 11页
• 分类号: S941
• 字数: 7993字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00169

摘要

以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为鱼体样本,克隆了罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae) scpB基因,构建了原核表达质粒pET32a(+)-scpB,转入大肠杆菌BL21(DE3)后, IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子金属螯合柱纯化及超滤管浓缩后,进行SDS-PAGE和Western blot分析鉴定。纯化的重组蛋白以不同剂量(1μg/g、3μg/g、5μg/g)免疫尼罗罗非鱼后,每周检测各实验组鱼体血清非特异性免疫指标[溶菌酶活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力]及抗体水平变化情况,并于免疫4周后以4倍LD50的剂量对其进行人工攻毒。结果显示,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在；对尼罗罗非鱼的相对免疫保护率为69.66%~89.00%,其中5μg/g 组的相对保护率最高；受免鱼体血清中溶菌酶活性、SOD活力和抗体水平较对照组有极显著提高(P<0.01),结果表明,重组蛋白ScpB具有较强的免疫原性和保护作用。本研究旨在为GBS多肽疫苗的研制奠定基础。