药用菊花SCoT-PCR反应体系的正交优化

• 作者: 何仁锋 冯尚国 沈宇峰 沈晓霞 王志安 王慧中 陈喆 高岭
• 来源期刊: 核农学报
• 关键词: 药用菊花 SCoT 优化 正交设计
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 植物诱变育种·农业生物技术
• 页码范围: 1781-1789
• 语种: 中文
• DOI: 10.11869/j.issn.100-8551.2014.10.1781

摘要

为进一步开发利用药用菊花种质资源,为药用菊花的遗传多样性及分子鉴定研究提供技术支持,建立并优化药用菊花的目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系,在方差分析基础上,运用L25(56)正交设计在5个水平上对影响药用菊花SCoT-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物5个因素进行优化试验,并对PCR结果进行分析.建立了药用菊花SCoT-PCR最佳反应体系(20 μL):模板DNA 10 ng,引物0.8 μmol· L-1,dNTPs 0.2 mmol· L-1,Mg2+ 2.0 mmol·L-1,Taq酶1.5U,SCoT反应的影响因素依次为:Taq酶＞引物＞dNTPs＞ Mg2+＞模板DNA.优化的SCoT-PCR反应体系在多个药用菊花品种遗传多样性研究中得到了验证,结果表现出良好的稳定性、重复性和多态性丰富等特点,该体系的建立为药用菊花品种遗传多样性分析、系统发育研究、遗传图谱构建、基因定位和分子标记辅助育种研究奠定了基础.