血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建

• 作者: 冀德君 吴连连 张腾业 朱孝荣 朱裕华 王珍珍 胡安康 袁红花 陈仁金
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: HO-2基因 真核表达载体 载体构建 基因表达
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 27-30
• 页数: 4页
• 分类号: S811.6
• 字数: 2807字
• 语种: 中文

摘要

为构建血红素氧合酶2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况.试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoR I和BamH I双酶切和测序鉴定.电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48 h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况.结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高(P＜0.01),在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高(P＜0.05).表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础.