长效人白细胞介素4拮抗剂的研究

• 作者: 刘波 吴军 唱韶红 宋西勇 巩新
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素4 拮抗剂 毕赤酵母 融合蛋白 半衰期
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 855-859
• 页数: 5页
• 分类号: R976
• 字数: 4970字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2014.11.004

摘要

目的：研制保留白细胞介素4受体（IL-4R）结合能力，但不具有激活下游信号活性的人白细胞介素4（IL-4）突变体M5，并通过抗体Fc融合延长其体内半衰期，为变态反应病药物研发提供基础。方法全基因合成人IL-4突变体M5，将其克隆到pBV220表达载体，在大肠杆菌DH5α中表达M5蛋白。同时构建嵌合基因M5-IgG1 Fc，并克隆到pPICZαA载体中，电转化糖基工程毕赤酵母GJK01，经甲醇诱导，分泌表达M5-IgG1 Fc融合蛋白。利用CTLL-2／IL-4R细胞测定纯化所得M5蛋白、M5-IgG1 Fc融合蛋白的IL-4拮抗活性，最后利用ELISA试剂盒检测比较两者在小鼠体内的清除速度。结果由大肠杆菌DH5α表达的M5蛋白和糖基工程酵母GJK01表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白都具有IL-4拮抗活性，它们在CTLL-2／IL-4R细胞上拮抗IL-4（5．6×10-2 nmol／ml）的EC50分别为（0．31±0．05）和（0．77±0．03）nmol／ml。小鼠体内M5蛋白在注射后0．5 h时达峰，其在血液中的含量为5．8×10－2 nmol／ml，而在2 h时血药浓度已下降为峰值的2．8％，在8 h时低于ELISA试剂盒的检测限。 M5-IgG1 Fc融合蛋白在注射后0．5 h时血液中浓度也达到峰值，为4．7×10－2 nmol／ml，120 h时其血药浓度下降为峰值的4．3％，而168 h时低于ELISA试剂盒的检测限。结论 M5蛋白具有IL-4拮抗作用。由糖基工程酵母表达的M5-IgG1 Fc融合蛋白不仅具有IL-4拮抗活性，而且在小鼠体内具有较长的半衰期，为下一步将其研发为治疗变态反应病的药物提供了理论基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	军事医学科学院生物工程研究所微生物工程研究室	32	100	6.0	9.0
2	吴军	军事医学科学院生物工程研究所微生物工程研究室	55	227	8.0	13.0
3	巩新	军事医学科学院生物工程研究所微生物工程研究室	33	121	6.0	10.0
4	唱韶红	军事医学科学院生物工程研究所微生物工程研究室	34	141	6.0	11.0
5	宋西勇	安徽大学生命科学学院	3	11	1.0	3.0