基于毛细管电泳的TILLING实验技术的建立

• 作者: 付强 任学良 张吉顺 王轶 邹颉
• 来源期刊: 中国烟草学报
• 学科: 生物学
• 关键词: TILLING 芹菜CEL I核酸酶 ABI遗传分析仪 毛细管电泳
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 75-78
• 页数: 4页
• 分类号: Q81
• 字数: 3798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5708.2014.04.015

摘要

CEL I内切酶特异识别并切断错配碱基，是建立TILLING实验技术平台的关键之一。本文从贵州省贵阳市当地种植的西芹中获得CEL I酶粗提物，利用一对具有已知单碱基差异的质粒作为底物验证所提CEL I酶粗提物的酶切活性，通过琼脂糖电泳和毛细管电泳对酶切产物进行检测，表明所获芹菜粗提物具有CEL I活性。本实验建立了适宜烟草TILLING实验的CEL I粗提物酶切体系：酶切温度42℃，酶切时间60 min，酶切反应总体积15μL，包括8μL PCR产物、4.5μL ddH2O、1.5μL酶切缓冲液(pH 7.5,500 mmol/ L KCL,100 mmol / L Tris-Cl,15 mmol / L MgCl2)和1μL CEL I酶（稀释为原始粗提液0.05倍）。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	任学良	贵州省烟草科学研究院烟草行业分子遗传重点实验室	47	346	10.0	15.0