蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子-蛋白激酶C信号通路的影响

• 作者: 吕建平 宫鑫 宿罡 李海辉 武志鹏 汪利敏 王丽丽 蔡善君
• 来源期刊: 中华眼底病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 眼损伤/病理生理学 视网膜色素上皮 细胞凋亡 光刺激
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 284-288
• 页数: 5页
• 分类号: R774.1
• 字数: 4955字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2014.03.014

摘要

目的 观察蓝光照射对人视网膜色素上皮细胞钙离子(Ca2-)-蛋白激酶C(PKC)信号通路的影响.方法 体外培养并鉴定人视网膜色素上皮(RPE)细胞,取第4代人RPE细胞随机分组进行实验.采用蛋白免疫印迹法测定培养细胞PKC蛋白表达,检测佛波酯(PMA)和钙磷酸结合蛋白(calphostin C)对PKC活性的影响,确定PMA与calphostin C影响PKC活性的最适宜浓度.采用非放射性核素法测定蓝光照射处理对培养细胞PKC活性的影响.采用20 W,波长450～500 nm医用蓝光灯作为光源,光照强度(2000±500) Lux,照射6h,24 h后终止培养,以此制造体外培养人RPE细胞光损伤.将培养细胞随机分成5个组,即无光照、单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合calphostin C、光照联合PMA组.其中,无光照组不接受光照;单纯光照组仅接受光照;光照联合硝苯地平组接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照联合calphostin C组接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照联合PMA组接受光照和100.0 nmol/L的PMA.用乙酰氧基甲基酯Ca2+荧光探针标记各组培养细胞,激光扫描共焦显微镜测定各组细胞内Ca2+浓度.比较各组细胞内Ca2+浓度差异.结果 经鉴定,体外培养人RPE细胞成功.100.0、200.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA处理的RPE细胞,差异有统计学意义(F=217.537,P＜0.05),但100.0、200.0 nmol/L PMA处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P=0.072).100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞中PKC蛋白相对表达量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C处理的RPE细胞,差异有统计学意义(F=164.543,P＜0.05),但100.0、200.0 nmol/L calphostin C处理组间PKC蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P=0.385).蓝光照射处理后,RPE细胞的PKC活性显著升高,与未接受蓝光照射处理的RPE细胞的PKC活性比较,差异有统计学意义(t=-9.869,P＜0.05).单纯光照、光照联合硝苯地平、光照联合Calphostin C、光照联合PMA组的RPE细胞内Ca2+浓度均高于无光照组,差异有统计学意义(F=26 764.92,P＜0.05);光照联合PMA组RPE细胞内Ca2+浓度高于单纯光照、光照联合硝苯地平及光照联合calphostin C组(P＜0.05),单纯光照组高于光照联合硝苯地平和光照联合calphostin C组(P＜0.05).结论 蓝光照射后人RPE细胞内PKC活性增高,Ca2+浓度增高.硝苯地平和calphostin C均能降低蓝光照射后人RPE细胞内Ca2+浓度,PMA增加细胞内Ca2+浓度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡善君	遵义医学院附属医院眼科	46	169	5.0	11.0
2	宿罡	遵义医学院附属医院眼科	24	47	4.0	5.0
3	武志鹏	河南省汝州市第一人民医院眼科	1	3	1.0	1.0
4	吕建平	遵义医学院附属医院眼科	4	13	3.0	3.0
5	李海辉	遵义医学院附属医院眼科	3	11	3.0	3.0
6	宫鑫	遵义医学院附属医院眼科	3	12	3.0	3.0
7	汪利敏	遵义医学院附属医院眼科	3	3	1.0	1.0
8	王丽丽	遵义医学院附属医院眼科	5	15	3.0	3.0