基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒TaqMan Real-Time PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 刘春 吴淑勤 曾伟伟 李永刚 梁红茹 殷亮 王庆 王英英 石存斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 基因Ⅰ型 TaqMan Real-Time PCR 定量分析
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 页码范围: 570-576
• 分类号: S941.41
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.48958

摘要

为了建立和应用可检测基因Ⅰ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的荧光定量检测方法,实验根据基因Ⅰ型GCRV的S6保守序列,分别设计扩增目的条带661 bp普通引物(P1、P2)、扩增目的条带159 bp荧光定量引物(F1、F2)和一条探针;同时构建含有目的片段的PVAX1-S6作为标准质粒,10倍梯度稀释构建质粒拷贝数与Ct值的标准曲线(Y=-3.389X+38.076).结果表明,此方法在3.9 ×107～3.9 ×101拷贝/μL之间相关性较好,R2为0.992,最小检测量为4拷贝/μL;且与基因Ⅱ型、Ⅲ型GCRV以及其他病原核酸无交叉反应.运用该方法检测16份草鱼出血病疑似样品,阳性结果为4份;而普通PCR检测仅2份显示阳性.本研究建立了针对基因Ⅰ型GCRV的荧光定量检测方法,具有高效、特异、灵敏、可重复性强的优点,适合于目前基因Ⅰ型GCRV的临床快速检测和病毒定量分析.