慢病毒介导的aggrecanase-2 shRNA转染对类风湿关节炎患者软骨细胞aggrecan的影响

• 作者: 刘英魁 吕成昱 张海宁 杜清峰 王英振
• 来源期刊: 中华骨科杂志
• 关键词: 软骨细胞 慢病毒属 软骨蛋白聚糖类 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 936-944
• 页数: 9页
• 字数: 6946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-2352.2014.09.008

摘要

目的 探讨慢病毒介导的agggrecanase-2 shRNA对类风湿关节炎患者软骨细胞aggrecan的影响.方法 术中切取类风湿关节炎患者关节软骨,通过胰酶+Ⅱ型胶原酶两步消化法消化软骨块并培养,取第2～3代软骨细胞.以慢病毒为载体将aggrecanase-2 shRNA5～8转染进入软骨细胞,观察转染后细胞的生长变化;以荧光定量PCR检测转染后第2、5、10天aggrecanase-2 mRNA水平的变化及aggrecan mRNA水平的变化,以循环阈值(cycle threshold,Ct)表示;用免疫组织化学方法检测aggrecan蛋白水平的变化,以积分光密度(integral optical density,IOD)表示,筛选最佳抑制序列.结果 以慢病毒为载体介导aggrecanase-2 shRNA转染软骨细胞后对细胞生长速度及形态无明显影响.加入病毒液200μl、100μl、50μl后感染复数分别为100、50、25,转染效率分别为90％、60％、30％.转染后aggrecanase-2mRNA的表达水平明显下降,特别是mRNA5,由开始的0.876 3±0.115 6下降至0.069 9±0.015 1 (P＜ 0.05);aggrecan mRNA水平显著上调,由开始的0.992 1±0.201 3增加至3.049 2±0.278 2(P＜ 0.05);aggrecan蛋白表达水平显著提高,由开始的496.160 5±225.673 7增加至4 525.433 0±1 131.813 0(P＜0.05);最佳抑制序列为aggrecanase-2 shRNA5.结论 以慢病毒为载体介导aggrecanase-2shRNA转染骨关节炎患者软骨细胞可有效干扰aggrecanase-2 mRNA表达,相应地增加aggrecan表达,是一种保护aggrecan的有效途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王英振	青岛大学医学院附属医院关节外科	128	711	15.0	21.0
2	张海宁	青岛大学医学院附属医院关节外科	70	224	8.0	11.0
3	吕成昱	青岛大学医学院附属医院关节外科	47	245	8.0	13.0
4	杜清峰	山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科	3	7	2.0	2.0
5	刘英魁	山东省平原县第一人民医院脊柱关节外科	2	5	1.0	2.0