酵母表面展示系统的改进及其在筛选烟草 PMT 基因启动子结合蛋白中的应用

• 作者: 张洪博 李加纳 柴友荣 牛海峡 王文静 陈红 马浩然
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 酵母表面展示 Smart cDNA 文库 DNA 结合蛋白 酵母单杂交 PMT 基因
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种?种质资源?分子遗传学
• 页码范围: 2081-2089
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2014.02081

摘要

筛选 DNA 结合蛋白常用的酵母单杂交系统在应用中有时会因内源干扰而影响筛选结果。与之相比，酵母表面展示系统(yeast surface display system)将外源蛋白展示在细胞表面，可通过接近体外实验的方法筛选 DNA 结合蛋白，能在一定程度上避免酵母内源干扰，但是，该系统在 DNA 结合蛋白筛选研究中的应用还很有限。本研究对酵母表面展示系统常用载体 pYD1进行改造，使其与 Clontech 公司的 Smart cDNA 文库构建系统相匹配，提高了 cDNA 酵母表面展示文库的构建效率，并通过比较试验建立了一个以酵母表面展示系统筛选 DNA 结合蛋白的试验体系。在以酵母单杂交筛选烟草腐胺甲基转移酶基因 PMT (putrescine N-methyltransferase)启动子结合蛋白的研究中，其茉莉素信号应答元件 GAG 片段是一段筛选效率极低的 DNA 片段。本研究利用改进的酵母表面展示系统对 GAG 片段的 DNA结合蛋白进行了筛选，并获得若干烟草蛋白基因，其中包括2个可能结合 GAG 片段的 ERF (ethylene responsive factor)转录因子。进一步研究发现，这2个 ERF 转录因子可与 GAG 片段在体外结合，但不能在酵母单杂交系统中激活由GAG 片段操纵的报告基因表达。本研究也证明酵母表面展示系统可有效克服酵母内源干扰，弥补酵母单杂交系统在筛选易受酵母内源干扰 DNA 结合蛋白方面的不足。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李加纳	西南大学农学与生物科技学院	82	981	17.0	28.0
2	陈红	西南大学农学与生物科技学院	168	1480	21.0	33.0
3	柴友荣	西南大学农学与生物科技学院	22	191	6.0	13.0
4	王文静	西南大学农学与生物科技学院	7	67	4.0	7.0
5	牛海峡	西南大学农学与生物科技学院	1	2	1.0	1.0
6	马浩然	西南大学农学与生物科技学院	1	2	1.0	1.0
7	张洪博	西南大学农学与生物科技学院	2	12	2.0	2.0