H3N2亚型猪流感病毒NS2基因表达产物特性分析

• 作者: 刘庆伟 李向东 沈阳 王晓杜 罗满林 邱亚峰 郭林 马志永
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流感病毒 NS2 克隆 表达 特性分析
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 5-10
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4633字
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法克隆猪流感病毒H3N2亚型NS2全长基因,构建NS2基因原核表达质粒pET-28a-NS2和真核表达质粒p3xFLAG-CMV-NS2,在大肠杆菌和真核细胞内表达NS2基因,并制备抗NS2多克隆抗体.用所制备的抗体分析p3xFLAG-CMV-NS2转染表达NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白.结果表明:经终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导后,重组蛋白NS2在大肠杆菌中得到表达.表达蛋白纯化后免疫Wistar大鼠制备抗NS2蛋白多克隆抗体,Western-blot分析表明抗NS2多克隆抗体可以识别大肠杆菌表达的NS2蛋白、转染Vero细胞表达的NS2蛋白和病毒感染细胞内的NS2蛋白.间接免疫荧光发现NS2蛋白主要定位于细胞质.本试验为进一步研究NS2蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础.