hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析

• 作者: 付雪 何津岩 姚智 孙晓明 宋娟 张纬 杨洁 葛林 高星杰
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 核糖核蛋白类,核不均一 绿色荧光蛋白质类 膜融合蛋白质类 hnRNP A1蛋白 pEGFP-C1 融合蛋白 应激颗粒
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 522-525
• 页数: 4页
• 分类号: Q591.2|Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.06.003

摘要

目的：构建包含有核不均一核糖核蛋白（hnRNP）A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1，并对增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA，以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特异性片段为反转录引物，反转录出包含hnRNP A1编码区序列的cDNA，并以其为模板，降落PCR法扩增出带EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点的目的基因，利用双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pEGFP-C1，在T4-DNA连接酶的催化下将两者连接构建成pEGFP-C1-hnRNP A1重组质粒，然后将重组质粒转染入HeLa细胞内，以激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP-hnRNP A1的荧光表达情况，Western印迹法检测EGFP与hnRNP A1的融合表达情况，最后进行细胞原位杂交及细胞免疫荧光检测在氧化应激状态下EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA（应激颗粒的标记成分）及DPC1a（加工体的标记蛋白）的应激共定位。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误，激光共聚焦荧光显微镜观察和Western印迹结果检测到绿色荧光融合蛋白的表达；EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA呈现共定位，但与DPC1a无共定位关系。结论重组pEGFP-C1-hnRNP A1质粒成功构建并表达，应激状态下EGFP标记的hnRNP A1参与应激颗粒的构成。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚智	天津医科大学免疫教研室	137	1428	20.0	33.0
2	葛林	天津医科大学生化教研室	15	45	4.0	5.0
3	付雪	天津医科大学基础医学研究中心	10	10	2.0	2.0
4	高星杰	天津医科大学基础医学研究中心	18	24	3.0	3.0
5	张纬	天津医科大学生化教研室	14	47	5.0	6.0
6	何津岩	天津医科大学生理教研室	21	177	4.0	13.0
7	宋娟	天津医科大学生化教研室	6	15	2.0	3.0
8	孙晓明	天津医科大学生化教研室	13	46	5.0	6.0