聚磷酸激酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及多杀菌素合成的影响

• 作者: 丁学知 唐斯佳 夏立秋 孙运军 徐妙 杨燕 罗林根 胡胜标
• 来源期刊: 中国生物防治学报
• 学科: 农学
• 关键词: 刺糖多孢菌 聚磷酸激酶基因 阻断 多杀菌素 接合转移
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 703-712
• 页数: 10页
• 分类号: S476
• 字数: 6274字
• 语种: 中文

摘要

聚磷酸激酶基因（Polyphosphate kinase gene，ppk）是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子，阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用 PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段，经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-链霉菌穿梭载体pOJ260上，构建阻断型载体pOJ260-ppk；通过接合转移将该功能质粒导入刺糖多孢菌中，获得了遗传性能稳定的重组菌株 S. sp-△ppk。对工程菌株的PCR检测结果显示，ppk基因片段已整合到刺糖多孢菌染色体上并成功阻断了该基因的表达。摇瓶发酵结果显示，工程菌株多杀菌素产量较原始菌株提高了122%。阻断聚磷酸激酶基因的表达对刺糖多孢菌的菌丝形态及生长发育产生了影响，并有效地促进该菌多杀菌素的生物合成。