人乙醛脱氢酶2的原核表达及其活性的鉴定

• 作者: 吴元欣 张小骥 潘博宇 王荷花 陈孝平 黄娟
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 乙醛脱氢酶2 克隆 条件优化 酶活鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 201-206
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.12.034

摘要

商品化的乙醛脱氢酶主要从动物细胞、肝细胞线粒体中提取,其来源受到很大的限制,而且价格昂贵.为了解决乙醛脱氢酶原料有限的问题,利用微生物发酵法获取乙醛脱氢酶.将人乙醛脱氢酶2基因(aldh2)克隆至原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-ALDH2.将构建的重组载体转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白得到大量表达;且对诱导表达条件进行优化.结果显示,在37℃,1.0 mmol/L IPTG诱导表达6h为最优表达条件.由于目的蛋白几乎都是以包涵体形式表达,为了得到有活性的乙醛脱氢酶,对包涵体变性、复性和纯化进行了研究.试验数据显示,酶的最终得率为14.49 U/L.并通过用Bradford法,测定复性蛋白的浓度约为77 μg/mL,进行活性检测表明,该复性蛋白具有乙醛脱氢酶活性,酶活性约为1.449 U/mL.通过构建重组载体pET32a-ALDH2和优化表达条件,aldh2在原核表达宿主E.coli BL21(DE3)得到大量表达;此外,利用透析复性法得到的复性蛋白酶活性有所提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴元欣	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	126	776	14.0	21.0
2	黄娟	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	13	59	4.0	7.0
3	陈孝平	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	14	38	4.0	5.0
4	张小骥	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	3	8	2.0	2.0
5	王荷花	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	5	12	2.0	3.0
6	潘博宇	武汉工程大学化工与制药学院绿色化工过程教育部重点实验室	4	8	2.0	2.0