含p53保守结合位点的microRNA表达载体的构建及应用

• 作者: 丁红梅 侯绿滨 李慧 李洁 秦性良 苏雪婷 葛兴枫 邵宁生 黄皑雪
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: p53 p53保守结合位点 转录调控 microRNA
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 183-188
• 页数: 6页
• 分类号: Q74|Q78
• 字数: 4114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.02.007

摘要

目的:构建含p53保守结合位点的microRNA(miRNA)表达载体,促进相关miRNA在具有野生型p53蛋白细胞中的高效表达.方法:改构miRNA表达载体pCMV-miR,在其多克隆位点前插入p53保守结合位点,分别将miR-138、miR-34a和miR-21前体序列pre-miR-138、pre-miR-34a和pre-miR-21插入上述改构的载体pCMV/p53-miR,将构建的pCMV/p53-miR-138、pCMV/p53-miR-34a和pCMV/p53-miR-21表达载体转染具有野生型p53的HeLa细胞和不表达p53的H1299细胞,分析p53对上述miRNA表达调控的影响.结果:转染改构的miRNA表达载体后,HeLa细胞中miR-138、miR-34a和miR-21的表达水平明显提高,它们对应的已知靶基因Cyclin D3、CDK2和PTEN的表达同时被显著下调.结论:在p53转录调控作用下,具有p53保守结合位点的miRNA表达载体能够更加有效地提高miRNA的表达水平;构建的载体不但可用于促进相关miRNA的表达,也能用于miRNA是否受p53调控的检测.