汉坦病毒S基因的克隆及体外转录

• 作者: 吕恒 张凤玉 张锦海 朱进 李丙军 潘秀珍 胡丹 郝丽娜 龚秀芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 汉坦病毒 克隆 体外转录
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 179-182
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2935字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.02.006

摘要

目的:通过基因克隆和体外转录,获得汉坦病毒汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的RNA全长cRNA,为汉坦病毒病原学检测提供阳性定量标准品.方法:设计汉滩型76118株和汉城型R22株S基因克隆引物,PCR获得相应片段,分别克隆至含双启动子的PCRⅡ载体中,测序鉴定无误后,重组质粒分别经内切酶Spe Ⅰ、Sac Ⅰ线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,产物经DNase处理、纯化后测定浓度,经RT-PCR验证.结果:获得汉滩型76118株及汉城型R22株S基因的cRNA片段,并可准确定量其拷贝数,76118株和R22株的质量浓度分别为80、17.58 ng/μL.结论:获得的cRNA样品可作为汉坦病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品.