尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用

• 作者: 卢迈新 叶星 曹建萌 曾祖聪 高风英
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 整胚原位杂交 胚胎发育 重组激活基因(Ragl)
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 页码范围: 1847-1854
• 分类号: Q954.4|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.49346

摘要

为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程.尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案.使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Ragl作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Ragl基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Ragl基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效.