双歧杆菌表达肠致病性大肠埃希菌EspA蛋白的体外研究

• 作者: 余治健 刘晓军 徐俊 李多云 潘伟光 邓名贵 邓启文 郑金鑫 陈重
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 肠致病性大肠埃希菌 EspA基因 双歧杆菌 蛋白诱导表达
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 993-994,999
• 分类号: R378.21
• 语种: 中文

摘要

目的 构建肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli,EPEC)EspA蛋白双歧杆菌表达重组菌株,并验证蛋白表达.方法 采用常规PCR扩增EspA片段,体外构建重组质粒pBAD-EspA,转化大肠杆菌BL21感受态细胞培养,挑取单克隆提取质粒,双酶切和PCR对重组质粒鉴定.pBAD-EspA电转化长双歧杆菌感受态细胞,挑取阳性克隆并PCR鉴定,经木聚糖诱导表达,蛋白质印迹试验(Western blot)分析验证EspA蛋自在双歧杆菌中的表达.结果 经酶切后琼脂糖凝胶电泳及测序结果证明pBAD-EspA重组质粒构建成功.pBAD-EspA重组质粒转化双歧杆菌后经阿拉伯糖诱导,在诱导表达不同时间点菌液沉淀均有良好的蛋白表达.结论 体外成功构建表达EPEC EspA蛋白的长双歧杆菌,为制备ESPA口服疫苗提供科学依据.