IGF2基因组印记介导结直肠癌靶向治疗的实验研究

• 作者: 何帮顺 李瑞 潘玉琴 王书奎 聂珍琳 许晔琼 高天翼
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因印记 重组腺病毒 胰岛素样生长因子2 结直肠癌 靶向治疗
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 肿瘤标志物
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: R735.3
• 字数: 5682字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨携带胰岛素样生长因子2印记系统(IGF2 imprinting)的重组腺病毒靶向治疗结直肠癌的可行性.方法 用PCR扩增H19、enhancer、CTCF、EGFP和E1A片段并克隆至pDC-315中构建成重组腺病毒穿梭质粒,分别与腺病毒骨架共转染包装成腺病毒Ad315-EGFP和Ad315-E1A.Ad315-EGFP分别转染GES-1、HCT-116、HCT-8和HT-29细胞,荧光显微镜观察各组细胞中EGFP的表达.以H101作为阳性对照,用RT-PCR及western blot检测Ad315-E1A和H101转染后各组细胞中E1A基因和蛋白质的表达;用MTT法和流式细胞术检测Ad315-E1A体外抗肿瘤效应.构建皮下移植瘤裸鼠模型,检测Ad315-E1A的体内抑瘤作用.结果 Ad315-EGFP转染各组细胞,EGFP仅在IGF2 LOI细胞HCT-8和HT-29中表达;各组细胞经Ad315-E1A转染后,E1A基因和蛋白质仅在LOI细胞(HCT-8和HT-29)中表达;HCT-8细胞经Ad315-E1A 10 PFU/cell转染72 h后,增殖活力降低至(53.4±6.4)％,凋亡率升高至(23.9±3.7)％;经H101转染的各组细胞,E1A基因和蛋白质仅在p53突变的细胞HT-29中表达;多点注射Ad315-E1A治疗HCT-8移植瘤显示其抑瘤率达32.1％.结论 成功构建了携带IGF2印记系统的重组腺病毒;重组腺病毒Ad315-E1A能够有效杀伤IGF2 LOI结直肠癌细胞.