半滑舌鳎 WT1a 基因的克隆与性别分化期的表达分析

• 作者: ZHU Ying 刘洋 张红 朱颖 温海深 陈松林
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 性别相关基因 WT1a 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 26-36
• 页数: 11页
• 分类号: S917
• 字数: 5900字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2014.00026

摘要

从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组序列中获得肿瘤抑制基因 WT1a 的部分序列,然后利用RACE 技术克隆了 WT1a 基因的全长,运用组织学方法,对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察,并分析了该阶段WT1a 的表达特征。克隆结果显示, WT1a 基因cDNA全长为1886 bp,开放阅读框(ORF)长为1470 bp,编码490个氨基酸,并且包含 KTS 三肽,5′-UTR 和3′-UTR 分别长为245 bp 和171 bp。在 ORF 末端发现2个微卫星(SSR)序列和2个跨膜螺旋区域,而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示, WT1a 基因的保守性很高,与人的同源性高达90%。通过组织切片观察发现,该批半滑舌鳎在56 d 时性腺开始分化,并且卵巢分化早于精巢。荧光实时定量分析结果显示, WT1a 在半滑舌鳎成鱼性腺中表达量显著高于其他各组织,在肝、肾、脾、心脏等组织中有微量表达,并且在成鱼性腺中,雄鱼表达量显著高于雌鱼,雌鱼显著高于伪雄鱼。在胚胎发育各时期以及初出膜后WT1a的表达结果显示,在12 h (原肠早期)显著升高,20 h (神经胚期)达到最高。在性腺分化早期雌雄性腺中的表达结果显示, WT1a 在雌雄半滑舌鳎16~66 d 的性腺中表达量持续平稳升高,在性腺分化时期表达量并没有特殊的变化。这些研究结果说明, WT1a 基因是半滑舌鳎性别相关基因,并在半滑舌鳎的性腺分化、发育过程中持续表达,但可能对性腺的分化过程并不起决定作用。