基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株的构建及鉴定

• 作者: 宋丽 康喜龙 杨芸 潘志明 焦扬 焦新安 熊丹 王静
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 农学
• 关键词: H5亚型禽流感 鞭毛蛋白 血凝素 原核表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 117-120,130
• 分类号: R378|S855.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建基于鞭毛蛋白的H5亚型禽流感疫苗候选株.方法 以H5N1禽流感病毒血凝素(HA)基因和鼠伤寒沙门菌SL7202基因组为模板,通过重叠PCR扩增出HA1-2-fljB基因片段,将其插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,再将其转化表达菌E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导目的蛋白表达.SDS-PAGE和Western blot法鉴定分析融合蛋白HA1-2-fljB.通过刺激HEK293-TLR5细胞,检测融合蛋白的TLR5生物学活性.结果 正确构建出重组质粒pET32a-HA1-2-fljB,SDS-PAGE显示,融合蛋白HA1-2-fljB相对分子质量(Mr)约为100 000,Western blot法表明融合蛋白具有良好的免疫反应性.TLR5生物活性实验结果显示,与HA1-2蛋白刺激组相比,HA1-2-fljB诱导HEK293-TLR5细胞分泌了高水平的IL-8(P＜0.01).结论 成功表达出具有TLR5活性的融合蛋白HA1-2-fljB,为研究H5亚型禽流感新型疫苗奠定了基础.