转录因子c-Jun对甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞内自噬标志蛋白LC3的调节作用

• 作者: 向阳 沈芸 肖长纪 赵静
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 绒毛膜癌 抗药性,肿瘤 甲氨蝶呤 原癌基因蛋白质c-jun 微管相关蛋白质类 自噬 细胞系,肿瘤
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 531-535
• 页数: 5页
• 字数: 5033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2014.07.011

摘要

目的：初步探讨转录因子c-Jun对甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞内自噬标志蛋白--微管相关蛋白1轻链3（LC3）的调节作用。方法以人绒毛膜癌细胞株JEG-3及前期构建的甲氨蝶呤耐药绒毛膜癌细胞株JEG-3/MTXR为研究对象，采用蛋白印迹法检测甲氨蝶呤药物处理后细胞内磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）和磷酸化c-Jun（p-c-Jun）的表达变化，以及JNK抑制剂SP600125对p-c-Jun蛋白表达的影响。RNA干扰技术沉默c-Jun基因检测甲氨蝶呤处理后JEG-3/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白的表达。染色质免疫共沉淀（ChIP）法结合实时荧光定量PCR技术测定甲氨蝶呤药物作用后JEG-3/MTXR细胞内c-Jun蛋白结合于LC3启动子上的相对富集量。结果（1）甲氨蝶呤作用后JEG-3/MTXR细胞内p-JNK和p-c-Jun蛋白的相对表达量呈时间依赖性上调，作用72 h时相对表达量分别为1.16±0.18、1.99±0.20，较0 h升高（分别为0.41±0.05、0.20±0.06），分别比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；SP600125抑制了甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内p-c-Jun蛋白表达的上调，甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内p-c-Jun蛋白的相对表达量为1.11±0.20，高于SP600125联合甲氨蝶呤者（0.30±0.04），两者比较，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）针对c-Jun基因的小分子干扰RNA （siRNA）--c-Jun-siRNA抑制了甲氨蝶呤诱导的JEG/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白表达的上调，甲氨蝶呤联合c-Jun-siRNA作用后JEG-3/MTXR细胞内LC3 mRNA和蛋白的相对表达量分别为1.24±0.17、0.52±0.07，低于甲氨蝶呤联合无义siRNA者（分别为3.03±0.43、1.20±0.15），分别比较，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）甲氨蝶呤作用后JEG/MTXR细胞内c-Jun结合于LC3启动子的相对富集量是无甲氨蝶呤作用者的（2.95±0.35）倍。结论转录因子c-Jun对LC3的调节作用可能参与绒毛膜癌发生甲氨蝶呤耐药的机制。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	向阳	100730中国医学科学院北京协和医院妇产科	8	40	5.0	6.0
2	沈芸	100730中国医学科学院北京协和医院妇产科	1	3	1.0	1.0
6	肖长纪	100730中国医学科学院北京协和医院妇产科	2	10	2.0	2.0
7	赵静	100730中国医学科学院北京协和医院妇产科	1	3	1.0	1.0