ANXA11表达稳定下调小鼠肝癌Hca-F细胞株的构建

• 作者: 刘淑清 唐建武 孙明忠 王嘉盛 郭春梅
• 来源期刊: 中华肿瘤防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ANXA11 肿瘤淋巴转移 Hca-F RNA干扰
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 前沿报道/论著
• 页码范围: 86-90
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-5269.2014.02.002

摘要

目的:构建膜联蛋白A11 (annexin A11,ANXA11)稳定下调的小鼠肝癌高淋巴转移力细胞株Hca-F.方法:合成2条针对ANXA11的发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)序列shRNA1和shRNA2,连接到pGPU6/GFP/Neo质粒中,并转染到Hca-F细胞,获得了稳定转染的pGPU6/GFP/Neo-ANXA11-Hca-F细胞株.通过有限稀释法筛选单克隆细胞,并利用RT-PCR和蛋白质印迹法验证ANXA11的表达变化.结果:成功构建了pGPU6/GFP/Neo-ANXA11重组表达质粒,并筛选出单克隆细胞；RT-PCR及蛋白质印迹法检测结果表明,与空白对照组比较,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-A11-Hca-F-1和2在mRNA水平,对ANXA11干扰率分别为(27.3±5.9)％和(58.3±12.4)％,P=0.001;在蛋白质水平,对ANXA11的下调率分别为(57.4±0.9)％和(87.1±6.1)％,P＜0.001；shRNA-2对ANXA11的表达抑制效果更为显著,P＜0.001.结论:成功建立了ANXA11表达稳定下调的小鼠肝癌Hca-F细胞株,为进一步研究ANXA11在淋巴转移中的作用奠定前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙明忠	大连医科大学生物技术系	27	96	6.0	8.0
2	刘淑清	大连医科大学生物化学教研室	38	105	6.0	8.0
3	唐建武	大连医科大学病理教研室	96	679	14.0	22.0
4	郭春梅	大连医科大学生物技术系	15	58	5.0	7.0
5	王嘉盛	大连医科大学生物技术系	2	3	1.0	1.0