紫外交联合并串联亲和纯化高效鉴定蛋白复合物组分的RNA结合活性

• 作者: 周淑如 岳莎 郭学敏
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 紫外交联 串联亲和纯化 RNA结合蛋白 布氏锥虫 CCCH型锌指蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 617-622
• 页数: 6页
• 分类号: Q5|Q7
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1206.2014.00021

摘要

RNA结合蛋白在RNA的生成与代谢中发挥着重要作用.我们在近年报道的PAR-CLIP (photoactivatableribonucleoside-enhanced crosslinking and immunoprecipitation)技术的基础上建立了一套快速、有效鉴定RNA结合蛋白的实验方法:以串联亲和纯化替代一步免疫沉淀获得高纯度蛋白-RNA复合物;将Sypro Ruby蛋白染色与RNA放射自显影相结合判断复合物中哪种或哪些组分为RNA结合蛋白,该方法命名为紫外交联合并的串联亲和纯化(cross-linking and tandem affinity purification,CLiTAP).运用该方法对布氏锥虫的三种锌指蛋白ZC3H7、ZC3H34和ZC3H5进行分析,发现ZC3H7作为帽结合蛋白复合物的核心组分具有很强的RNA结合能力;ZC3H34结合RNA能力较弱,但其互作蛋白具有强的RNA结合活性;相比之下,ZC3H5及其复合物组分皆无RNA结合活性.这些结果表明,CLiTAP与蛋白质鉴定方法相结合,能够有效鉴定靶蛋白复合物中的RNA结合蛋白种类,也为进一步定位RNA结合位点、研究RNA结合蛋白的结构及作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭学敏		11	8	2.0	2.0
2	岳莎		1	0	0.0	0.0
3	周淑如		1	0	0.0	0.0