猪IL-10 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立

• 作者: 于江 周明明 夏焱春 张玉玉 朱希旺 李俊 杜以军 王金宝 陈智
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 白介素-10 PRRSV 免疫抑制 Real-time PCR
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 13-17
• 页数: 5页
• 分类号: S811.6
• 字数: 3785字
• 语种: 中文

摘要

白介素-10(IL-10)是一种具有免疫抑制作用的多能细胞因子.能够引发猪免疫抑制效应的多种病毒在感染宿主时均伴随有明显的IL-10上调,其中就包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),然而并不是所有的PRRSV毒株都能上调IL-10.为了详细探讨PRRSV免疫抑制与IL-10上调之间的关系以及PRRSV感染上调IL 10的具体分子机制,本研究针对猪IL-10以及看家基因β actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建了各自含有IL-10、βactin引物扩增序列的重组质粒为阳性标准品,建立了以2△△ct为基础的SYBR GreenⅠrealtime PCR检测方法.该方法线性关系良好;敏感性高,两种基因的检测下限均为1×101 copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性良好,批内变异系数小于2％,批间变异系数小于3％;目的基因及内参基因的扩增效率较高,分别为92.7％、97.8％.综上所述,该方法可以用于猪IL-10 mRNA水平的表达分析.