L-Wnt3a细胞用于制备胚胎干细胞饲养层的研究

• 作者: 吴侠 吴晨辰 武丽琼 汪金泽 焦翠华 魏著英
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: L-Wnt3a细胞 小鼠胚胎干细胞 条件培养液
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1195-1203
• 页数: 9页
• 字数: 6848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.10.002

摘要

小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)作为胚胎干细胞培养的饲养层细胞,受到细胞代次等因素限制,需要长期反复制备,消耗大量的实验动物.寻找可替代小鼠胚胎成纤维细胞支持干细胞生长增殖的稳定细胞系,对于降低干细胞的培养成本和减少工作量具有重要意义.L-Wnt3a细胞是一个能够稳定向细胞外分泌Wnt3A蛋白的永生细胞系,目前尚不清楚其是否支持小鼠胚胎干细胞的培养.本研究探讨L-Wnt3a作为饲养层细胞对于小鼠(Mus musculus)胚胎干细胞系的建立以及该细胞条件培养液对无饲养层培养小鼠胚胎干细胞的影响.实验结果表明,丝裂霉素C浓度为10 μg/mL,作用4h时,可显著抑制L-Wnt3a细胞的体外生长而不影响细胞的活力.用该细胞制备饲养层,原代分离、培养小鼠胚胎干细胞,成功建立小鼠胚胎干细胞系.利用L-Wnt3a细胞制备条件培养液进行胚胎干细胞的培养,结果显示,L-Wnt3a条件培养液可支持小鼠胚胎干细胞在无饲养层条件下自我增殖,该条件下培养的胚胎干细胞表达碱性磷酸酶、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin (E-CAD)和SSEA-1多能性因子,并能够在体内、外分化为3个胚层,形成嵌合体后代.L-Wnt3a细胞作为饲养层细胞,能够成功分离获得小鼠胚胎干细胞,可以避免小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层细胞存在的代数限制、制备繁琐等问题;并且L-Wnt3a条件培养液可以在无饲养层条件下维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,能够在一定程度上有效避免饲养层细胞对胚胎干细胞造成的不利影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏著英	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室	15	38	4.0	6.0
2	吴晨辰	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0
3	武丽琼	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0
4	焦翠华	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0
5	汪金泽	内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室	1	0	0.0	0.0