胶体金免疫层析法床旁快速检测烧伤创面铜绿假单胞菌的效果

• 作者: 刘丽 吴艳敏 孙济宇 官杰 王琪 白光锐 罗晓庆
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 关键词: 烧伤 假单胞菌,铜绿 胶体金 免疫层析法
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 270-272
• 页数: 3页
• 字数: 2959字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2014.03.020

摘要

目的 与传统细菌培养法相比较,探讨胶体金免疫层析(GICA)法检测烧伤创面铜绿假单胞菌(PA)的可行性. 方法 2012年1-12月,采集齐齐哈尔医学院附属第三医院烧伤科收治的96例烧伤患者创面分泌物,应用传统细菌培养法鉴定为31例阳性(31株PA)、65例阴性.(1)将2株杂交瘤细胞分别接种于5只BALB/c小鼠腹腔制备抗OprH单克隆抗体,斑点印迹法检测抗体特异性,ELISA法检测抗体型别,间接ELISA法检测抗体效价,菲竞争ELISA法检测抗体亲和力.(2)取1株判定为AmpC β内酰胺酶(简称AmpC酶)阳性的PA,提取酶提取物,单独或与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂免疫10只BALB/c小鼠制备抗AmpC酶多克隆抗体,间接ELISA法测定抗体效价.(3)制作GICA试纸条.用1 mL胶体金(1 mg/mL)分别标记20 μg抗OprH单克隆抗体、抗AmpC酶多克隆抗体,将二者喷涂于玻璃纤维膜上并划于硝酸纤维素膜上,将1.5 mg/mL羊抗鼠IgG划于距OprH检测线1 cm处.取传统细菌培养法鉴定的31株PA及金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、奇异变形杆菌标准菌株各1株,检测试纸条特异性;采用1×105、5×105、1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL PA标准菌株检测试纸条敏感性;将试纸条在4、37℃分别存放10、20、30 d后,观察其检测浓度为1×106、1 ×107、1×108 CFU/mL的PA标准菌株的稳定性.(4)用GICA试纸条检测96例患者临床样本,计算与传统细菌培养法鉴定PA结果的阳性符合率. 结果 (1)制备的抗体与PA重组外膜蛋白OprH有较好的结合性,经鉴定确认为抗OprH单克隆抗体.2株杂交瘤细胞分泌的抗OprH单克隆抗体均为IgG2a亚类,效价分别为1∶2.02×106、1∶1.83×10 7,亲和常数值分别为7.3×107、3.6×108.(2)抗AmpC酶多克隆抗体效价为1∶3.05×106.(3)经GICA试纸条检测,31株传统细菌培养法鉴定的PA中29株阳性、2株阴性,AmpC酶为阴性;金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、奇异变形杆菌均为PA、AmpC酶阴性.PA标准菌株浓度为1×106、1×107、1×108 CFU/mL时,为PA阳性、AmpC酶阴性;PA标准菌株浓度为5×105 CFU/mL时,为PA弱阳性、AmpC酶阴性;PA标准菌株浓度为1×105 CFU/mL时,为PA、AmpC酶阴性.除37℃放置30 d的GICA试纸条检测1 × 106 CFU/mL的PA标准菌株结果为弱阳性外,4、37℃放置各时相点GICA试纸条对1×106、1×107、1×108 CFU/mL的PA标准菌株检测结果均为阳性;AmpC酶均为阴性.(4)GICA试纸条与传统细菌培养法鉴定PA的阳性符合率为93.55％ (29/31). 结论 GICA法检测PA的灵敏度高、特异性好、需时短,且可鉴定其是否产AmpC酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	官杰		62	368	10.0	16.0
2	吴艳敏		33	113	7.0	9.0
3	王琪		66	371	11.0	16.0
4	罗晓庆		47	261	9.0	13.0
5	刘丽	齐齐哈尔市第一医院检验科	51	123	5.0	10.0
6	白光锐	齐齐哈尔市第一医院检验科	7	15	2.0	3.0
7	孙济宇	黑龙江齐齐哈尔医学院附属第三医院烧伤科	2	6	1.0	2.0