PPFP基因转染人正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1前后的蛋白质组学研究

• 作者: 刘剑鸣 李新营 李萃 段朝军 王志明 邓姣
• 来源期刊: 肿瘤
• 学科: 医学
• 关键词: 甲状腺肿瘤 基因转移技术 蛋白质组学 PPFP基因
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 795-802
• 页数: 8页
• 分类号: R735.3+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2014.09.004

摘要

目的:采用蛋白质组学技术检测转染致瘤基因PPFP前后人正常甲状腺Nthy-ori 3-1细胞中蛋白质组分的改变,筛选PPFP基因调控的蛋白,以期为寻找甲状腺滤泡状癌(follicular thyroid carcinoma,FTC)的标志性蛋白或新的药物靶标蛋白提供线索.方法:收集Nthy-ori 3-1、Nthy-ori 3-1vector和Nthy-ori 3-1PPFP细胞,提取细胞总蛋白,采用二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)制备3组细胞的总蛋白2-DE图谱;应用PDQuest软件对2-DE图谱进行比较分析,寻找差异表达的蛋白质点;采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析技术对这些差异表达的蛋白质进行鉴定,并选取其中MALDI-TOF-MS鉴定分数较高、覆盖率较大且认为与FTC发生和发展关系较为密切的5种蛋白[prohibitin、半乳糖凝集素1(galectin-1)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8)、cytokeratin 19和热休克蛋白27 (heat shock protein 27,HSP27)]作为验证对象,采用蛋白质印迹法检测各蛋白在3组细胞中的表达水平.结果:采用2-DE技术建立了Nthy-ori 3-1、Nthy-ori 3-1vector和Nthy-ori 3-1PPFP3组细胞的2-DE图谱.应用PDQuest软件分析发现,Nthy-ori 3-1PPFP细胞与亲本Nthy-ori 3-1细胞及空载体Nthy-ori3-1vector细胞中差异在2倍以上的蛋白质斑点有38个,采用MALDI-TOF-MS质谱分析技术结合数据库搜索,共鉴定出了28个差异蛋白质点.Nthy-ori 3-1PPFP细胞与2个对照组相比,表达上调的点有19个,表达下调的点有9个.蛋白质印迹法检测结果与蛋白质组学研究结果完全一致.结论:PPFP基因转染Nthy-ori 3-1细胞后共筛选获得28个差异表达的蛋白,这些差异表达的蛋白可能是PPFP基因调控的蛋白,为进一步阐明FTC发生和发展的分子机制奠定了基础.