在体制备大鼠全肾去细胞支架的程序性分析

• 作者: 余雅玲 唐茂林 林刻智 梅劲 王志斌 赵丽娜 邵营宽 陈加俊
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 去细胞 肾脏 细胞外基质 化学法 灌注法 组织工程 大鼠
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 组织学胚胎学发育生物学
• 页码范围: 267-272
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 3712字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1356.2014.02.023

摘要

目的 通过在体灌注Triton X-100、SDS溶液法制备大鼠全肾去细胞生物支架,并对支架制备过程中的关键步骤进行程序性检测、分析,为制备科学合理的实验用大鼠全肾去细胞生物支架提供基础.方法 SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.肝素化后直接切取肾脏作为对照组(control组);肝素PBS灌注组(H组);肝素PBS、Triton X-100灌注组(HT组);肝素PBS、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)溶液灌注组(HTS组).HE、Masson、PAS染色及透射电镜观察各组肾组织病理及超微结构改变,免疫荧光结合4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)观察各组胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、层黏连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)、硫酸乙酰肝素蛋白多糖2(HSPG2)、弹性蛋白(elastin)及细胞核的表达情况,总DNA测定各组DNA残留浓度.结果 Triton X-100、SDS灌注6h左右制备大鼠肾脏去细胞生物支架.在灌注过程中,肾内细胞和细胞碎片逐渐被清洗,最终变成半透明状.HE、Masson、PAS染色及透射电镜显示连续分布、形态排列类似肾小球、肾小管轮廓结构的网状结构,基膜连续完整.免疫荧光结合DAPI染色结果表明,去细胞过程中细胞外基质中的重要蛋白collagen IV、LN、FN、HSPG2、elastin都较好的得到了保存,细胞核在灌注过程中逐渐减少,直至完全消失;最终残留组织的DNA为4.90μg/g.结论 通过合适浓度和灌注比例的Triton X-100、SDS制备大鼠肾脏去细胞生物支架,并对其进行程序性分析,发现能有效清除大鼠肾内所有细胞成分,较完整的保留网络状肾及肾血管细胞外基质结构和成分,是一种简单易行且较为理想的制备实验用全肾生物支架的方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王志斌	温州医科大学人体解剖学教研室	10	45	5.0	6.0
2	梅劲	温州医科大学人体解剖学教研室	22	148	8.0	11.0
3	林刻智	温州医科大学人体解剖学教研室	11	50	5.0	6.0
4	赵丽娜	温州医科大学人体解剖学教研室	4	11	2.0	3.0
5	余雅玲	温州医科大学人体解剖学教研室	4	13	2.0	3.0
6	邵营宽	温州医科大学人体解剖学教研室	3	17	2.0	3.0
7	陈加俊	温州医科大学人体解剖学教研室	1	9	1.0	1.0