锦鲤疱疹病毒GZ1301株的分离与鉴定

• 作者: 刘春 吴淑勤 曾伟伟 李莹莹 梁红茹 潘厚军 王庆 王英英 石存斌
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 锦鲤 锦鲤疱疹病毒 TK基因 病毒鉴定
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 页码范围: 1159-1166
• 分类号: S941
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.49159

摘要

2013年4月,广东省一锦鲤养殖场暴发不明病因疾病,濒死锦鲤在塘边游动缓慢直至死亡,死亡率高达100％.现场采样发现,发病锦鲤体长25 cm,眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑点,解剖发现内脏器官包括肝、脾、肾肿大.细菌分离结果显示,内脏器官肝脏和肾脏中未分离到细菌.提取自然发病鱼的肝、脾、肾、鳃组织DNA作为模板,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的锦鲤疱疹病毒(KHV)检测引物进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的特异性产物.NCBI的Blast搜索结果显示,扩增序列与KHV胸苷激酶(thymidinekinase,TK)基因核苷酸序列同源性为99％.病鱼内脏组织研磨过滤除菌后,腹腔注射20尾锦鲤,可复制出与自然发病相似的症状,并于7d内全部死亡.取病鱼的鳃和肾脏研磨过滤除菌后进行细胞感染实验,结果显示,组织滤液感染CCB细胞后,盲传5代可以观察到典型的细胞病变效应(CPE).将出现典型CPE的CCB细胞进行超薄切片制备和电镜观察,电镜下病毒呈对称20面体,直径约100 nm.将出现典型CPE的细胞进行间接免疫荧光实验,可以观察到特异性荧光.根据TK基因全长序列建立系统进化树,证实该毒株为KHV亚洲型毒株,暂命名为KHV-GZ1301株.研究结果可为KHV起源进化、分类以及疾病防控提供重要材料.