虹鳟IgM重链恒定区的表达及兔抗血清的制备

• 作者: 刘淼 刘红柏 卢彤岩 尹家胜 徐黎明 曹永生 赵景壮
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 虹鳟 IgM 基因克隆 抗血清
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 页码范围: 1175-1181
• 分类号: Q785|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2014.49221

摘要

为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达.SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90％.利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长IgM反应效价为1∶20 000并且呈现出抗原计量依赖性.研究表明,重组IgM蛋白与虹鳟血清中的天然IgM重链恒定区具有近似的结构,利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然IgM发生特异性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	尹家胜	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	165	2289	27.0	37.0
2	刘红柏	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	102	1157	17.0	29.0
3	卢彤岩	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	150	1526	19.0	31.0
4	徐黎明	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	26	65	5.0	6.0
5	赵景壮	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	17	33	4.0	5.0
6	刘淼	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	12	33	4.0	5.0
7	曹永生	中国水产科学研究院黑龙江水产研究所	14	29	3.0	4.0