利用RNAi技术研究水稻瘤矮病毒P8蛋白在病毒装配中的作用

• 作者: 刘华敏 李俊钦 贾东升 郑立敏 陈红燕 魏太云
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 水稻瘤矮病毒 P8蛋白 RNA干扰 电光叶蝉 介体昆虫培养细胞
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1418-1423
• 页数: 6页
• 字数: 3889字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.11.012

摘要

水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus, RGDV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)的一个成员，由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)和黑尾叶蝉(Nephotettix cincticeps)以持久增殖型方式传播。其基因组编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白。已知结构蛋白P8是病毒外层衣壳的主要成分，但其在病毒侵染介体细胞过程中的功能尚未弄清。本研究利用体外合成的dsRNA诱导的RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术，研究RGDV P8蛋白在病毒侵染电光叶蝉培养细胞中的功能。通过免疫荧光标记技术对dsP8处理后的电光叶蝉培养细胞进行RGDV侵染观察，发现dsP8处理不仅抑制了P8在细胞内的正常表达，同时也抑制了病毒在细胞内的积累。随后通过SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot分别检测病毒的dsRNA基因组和病毒蛋白水平的变化，发现dsP8处理显著降低了病毒双链RNA (double-stranded RNA, dsRNA)基因组的合成水平和病毒P8蛋白的表达量。由此推测RGDV P8蛋白参与了病毒粒体的组装过程和病毒在介体昆虫细胞内的有效增殖和侵染过程。本研究结果为利用RNAi技术控制水稻瘤矮病的传播提供了重要的理论依据。