一种原代肺上皮细胞体外培养方法

• 作者: 凌婧怡 刘岩峰 吴逊 李玉霞 杨丹 王薇 白东梅 贾天野 金晶
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 原代细胞培养 肺上皮细胞 柯萨奇病毒和腺病毒受体 细胞贴壁
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 676-681
• 页数: 6页
• 分类号: Q25
• 字数: 5320字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2014.05.018

摘要

目的:建立一种操作简便、重复性好的体外培养BALB/c小鼠原代肺上皮细胞(AEC)的方法,探究不同发育阶段小鼠AEC中柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)表达量的变化,及其对小鼠原代AEC贴壁的作用.方法:手术获取小鼠肺组织,机械法剪碎肺组织,PBS缓冲液清洗肺组织块数次去血,联合使用链霉蛋白酶和胶原酶Ⅰ消化、分离肺组织块获得单细胞悬液,差速离心逐步清除其他种类的细胞,达到纯化AEC的作用.细胞在Ⅰ型鼠尾胶原蛋白包被过的细胞板中培养,光学显微镜下观察不同发育阶段AEC贴壁、生长状态;免疫荧光法鉴定AEC,检测AEC中CAR的表达量.结果:体外获得不同发育阶段BALB/c小鼠的原代AEC;胎鼠、幼鼠AEC贴壁并开始增殖所需时间较成体鼠短;胎鼠及幼鼠AEC中CAR的表达量明显较成体鼠高.结论:建立了稳定可重复的分离、纯化、体外培养小鼠原代AEC的方法,证明了AEC中的CAR可以促进原代AEC贴壁,为完善原代细胞培养方法提供了科学依据.