烟草CYP82E4v1基因调控降烟碱的生物合成

• 作者: 孙洪荣 秦利军 赵丹 赵德刚 赵杰宏
• 来源期刊: 烟草科技
• 学科: 工学
• 关键词: 烟草 CYP82E4v1 降烟碱 RNAi 超量表达
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 烟草农学
• 页码范围: 68-74,86
• 页数: 8页
• 分类号: TS413
• 字数: 6656字
• 语种: 中文

摘要

为明确烟草烟碱去甲基酶基因CYP82E4v1在降烟碱生物合成中的调控作用,通过农杆菌介导,将含CYP82E4v1超量表达的植物表达载体pLF-35S-CYP和干涉表达的植物表达载体pLF-35S-CYPi分别遗传转化烟草品种K326,共获得转基因植株61株,其中超量表达植株42株,干涉表达植株19株.HPLC测定表明,超量表达植株降烟碱含量比对照烟草品种K326高88.9％,而干涉表达植株降烟碱含量比对照烟草低61.1％,表明CYP82E4v1的超量表达能提高烟草降烟碱含量,该基因的表达受到抑制时降烟碱合成受阻.Real-Time PCR分析结果表明,超量表达植株中CYP82E4v1基因的表达为对照烟草的20倍以上,在干涉表达植株中其表达量仅为对照烟草的6％.同时,在干涉表达植株中其他降烟碱合成基因,如CYP82E5v2和CYP82E10等也受到不同程度的抑制.此外,在构建植物表达载体时,引入衰老基因SAG12启动子驱动重组酶基因FLP的“Gene-deletor”表达元件,在烟草叶片发育后期以清除转基因植株中外源GUS::NPTⅡ基因,从而获得了降烟碱含量低且不合筛选标记基因的转基因烟草植株.