不同剂量TGF-β1在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中的作用

• 作者: 尹良军 张亚梅 李锐冬 汪洋 邓忠良 陈亮
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形成蛋白9 转化成因子β1 间充质干细胞 成骨分化
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 98-104
• 分类号: R322.71|R329.21|R341
• 语种: 中文

摘要

目的 分析联合应用不同剂量TGF-β1对BMP9诱导间充质干细胞成骨分化过程的影响,寻找最佳的促进BMP9成骨的TGF-β1剂量,为联合不同细胞因子促进组织工程骨再生寻找有效途径.方法 应用鼠间充质干细胞株C3H10T1/2,以重组腺病毒法将其导入BMP9,再分别施加0、5、10、20 ng/mL TGF-β1蛋白处理,建立BMP9联合TGF-β1诱导间充质干细胞成骨分化模型.条件培养基法获取含活性良好的TGF-β1蛋白上清液;改良SEAP化学发光法和组织化学染色法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达及活性;茜素红S染色检测钙盐沉积;实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测成骨相关基因Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,COL Ⅰ)、骨桥素(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)的mRNA转录表达水平和蛋白表达水平改变;流式细胞仪检测细胞周期;台盼蓝拒染法计数活细胞监测细胞增殖.结果 5 ng/mL TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理能更早、更多地提高ALP活性和引起钙盐沉积,持续处理17 d后钙盐沉积结果不再显示明显差异,TGF-β1单独处理与对照组间无明显差异.随TGF-β1剂量增加,ALP活性和钙盐沉积效应受到抑制.5 ng/mL TGF-β1与BMP9联合处理较BMP9单独处理使COL Ⅰ、OPN、OCN的mRNA转录水平和蛋白表达水平明显增高,COL Ⅰ增高变化发生较早和显著;TGF-β1应用剂量达到20 ng/mL出现基因转录和蛋白表达受到抑制,但COL Ⅰ升高趋势仍能维持.BMP9促进细胞增殖,TGF-β1对该效应起抑制作用,细胞周期转化表现G0/G1期阻滞.结论 在BMP9诱导间充质干细胞成骨分化中,适量的TGF-β1联合应用具有促进作用;BMP9与TGF-β1在诱导成骨分化中可能存在协同作用关系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪洋	重庆医科大学附属第二医院骨科	230	2052	23.0	33.0
2	邓忠良	重庆医科大学附属第二医院骨科	149	972	16.0	22.0
3	陈亮	重庆医科大学附属第二医院骨科	63	349	10.0	16.0
4	尹良军	重庆医科大学附属第二医院骨科	29	133	6.0	10.0
5	张亚梅	重庆医科大学附属第二医院骨科麻醉科	8	87	4.0	8.0
6	李锐冬	重庆医科大学附属第二医院骨科	8	29	4.0	5.0