Orai3参与了HUVECs外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成

• 作者: 何芳 孙志萍 庞丽娟 王腊梅 王静 赵慧 钟华
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: Orai3蛋白 一氧化氮 钙 人脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-10
• 页数: 10页
• 分类号: R364.1+4
• 字数: 6247字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.01.001

摘要

目的:研究Ca2+通道蛋白Orai3在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)外钙敏感受体(CaR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的作用和机制.方法:(1)利用转染技术将构建的Orai3干扰质粒(Orai3 shRNA)转染HUVECs,采用激光共聚焦显微镜观察细胞转染效果,实时定量RT-PCR和Western blotting检测Orai3 shRNA转染后Orai3 mRNA和蛋白的表达以及抑制效率.(2)取第2～5代细胞随机分组:特异性质粒转染组即实验组(Orai3shRNA组)、未转染组即空白对照组(control组)和空质粒组(vehicle组),将上述3组细胞分别与CaR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC、激活SOC)孵育,用荧光探针Fura-2/AM和DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化.结果:(1)实时定量RT-PCR及Western blotting检测结果显示:与control组相比较,shOrai3-77干扰后,Orai3 mRNA的表达明显降低(抑制率为84.5％,P＜0.05),Orai3蛋白的表达亦明显降低(抑制率为70.68％,P＜0.05).(2)[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与control组及vehicle组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai3 shRNA转染组中[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05),而vehicle组无显著差异(P＞0.05).结论:在HUVECs中Orai3参与了CaR经SOC和ROC激活介导的钙内流和NO生成.