摘要:
目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)裂解液对人胃上皮GES-1细胞β-catenin蛋白信号途径及其下游靶基因Cyclin D1和c-myc表达,以及对细胞增殖的影响.方法:用H.pylori超声裂解液处理GES-1,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白亚细胞定位以及核内蛋白表达量的变化;荧光定量聚合酶链反应(quantitativepolymerase chain reaction,QRT PCR)检测Wnt/β-catenin蛋白信号下游靶基因Cyclin D1和c myc基因mRNA表达水平的变化;MTT法检测细胞的增殖.结果:H.pylori裂解液处理人胃上皮GES-1细胞后,H.pylori处理组引起了β-catenin蛋白从细胞膜至细胞质以及细胞核内的移位,呈时间依赖性.蛋白质印迹法检测结果证实,与对照组相比,H.pylori处理组在12、24 h分别引起了细胞核内β-catenin蛋白表达量的增加,分别为0.31±0.05和0.55±0.04,P值均<0.01.QRT-PCR检测发现,与对照组相比,H.pylori处理组12 h c-myc基因表达量没有变化,F=0.338,P>0.05;而24 h的表达量明显增高,F=39.290,P<0.01;H.pylori处理组12 h Cyclin D1基因表达量明显增高,F=72.567,P<0.01;而24 h的表达量虽然增高,但是差异无统计学意义,F=2.368,P=0.175;且明显低于12h的表达量,F=37.468,P<0.01.MTT法检测显示,5μL的H.pylori裂解液处理细胞12、24和36 h的增殖抑制率分别为-13.3%、28.5%和 62.5%;10μL的分别为-24.1%、-58.0%和-87.9%;20 μL的分别为-39.8%、-131.3%和-165.2%.结论:H.pylori裂解液异常激活了β-catenin蛋白信号途径,促进β-catenin蛋白向细胞核内移位,通过上调其下游靶基因cyclin D1和c myc的mRNA表达,促进细胞增殖,其效应呈时间以及浓度依赖.