GSK3β及其选择性剪接体mRNA实时荧光定量PCR检测体系的构建

• 作者: 刘静 徐颜美 李静 林晋 王小中 陈希敏 陈鑫 黄林凤 黄波
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 糖原合酶激酶3β 慢性粒细胞白血病 选择性剪接
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4032字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立并评估检测糖原合酶激酶3β(GSK3β)及其选择性剪接体(GSK3β△ex8+9)mRNA的实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法.方法 提取慢性粒细胞白血病(CML)和CML急变期患者外周血或/和骨髓总RNA,分别扩增GSK3β及GSK3β△ex8+9目的片段并构建质粒标准品和标准曲线,建立qRT-PCR法并检测其重复性和特异性.结果 成功扩增出GSK3β(133 bp)和GSK3β△ex8 +9(219 bp)目的条带,建立了检测两目的基因的qRT-PCR法;相应的标准曲线显示循环阈值与模板浓度线性关系良好,相关系数(r)分别为0.997和0.999;两反应体系的重复性结果显示,批内和批间变异系数(CV)均＜2％;特异性结果显示,GSK3β反应体系扩增对照组mRNA仅显示GSK3β条带,GSK3 βAex8+9反应体系扩增对照组mRNA均无GSK3β △ex8+9条带出现.结论建立的qRT-PCR法重复性好,特异性强,可用于GSK3β和GSK3β△ex8+9基因表达的定量检测.