单纯疱疹Ⅱ型病毒UL29基因shRNA表达载体的干扰效应

• 作者: 吕延成 潘晓瑜 袁俊杰 黄畅
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 关键词: 疱疹病毒2型,人 RNA干扰 shRNA UL29基因
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 691-694
• 页数: 4页
• 字数: 2962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2014.05.006

摘要

目的：应用RNA干扰技术，针对单纯疱疹Ⅱ型病毒（HSV-2）UL29基因构建短发夹RNA重组表达载体，观察其对HSV-2的干扰效应。方法：针对HSV-2 UL29基因筛选出4条拟干扰靶位点序列，分别设计、合成4组靶向UL29基因shRNA的基因真核表达载体。通过脂质体转染到HEK293细胞。再将HSV-2接种到HEK293细胞中。采用终点滴定法检测病毒滴度，RT-PCR检测shRNA对转录水平的影响，Western-blot检测shRNA对蛋白质表达水平的影响。结果：终点滴定法结果显示UL29shRNA各组均可不同程度降低病毒感染滴度，与空白组（未转染重组表达载体）比较差异显著（P＜0．01）。RT-PCR结果显示，与空白组比较，4组抑制率分别为28．80％、59．95％、66．08％、36．27％，差异均具有显著性（P＜0．05），shRNANC（不针对任何基因的序列）与空白组相比差异无显著性，其中以UL29shRNA1461组效果为最佳。 Western-blot检测表明UL29shRNA各组ICP8蛋白表达水平比阴性对照组明显降低。结论：UL29shRNA能有效干扰HSV-2UL29基因的表达，抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。