干扰水稻瘤矮病毒（RGDV）非结构蛋白（Pns12）的表达抑制病毒在介体昆虫培养细胞内的复制

• 作者: 刘华敏 谢联辉 贾东升 郑立敏 陈红燕 魏太云
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 水稻瘤矮病毒(RGDV) 介体昆虫培养细胞 非结构蛋白(Pns12) RNA干扰(RNAi)
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1321-1328
• 页数: 8页
• 字数: 5022字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.11.001

摘要

水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus, RGDV)属呼肠孤病毒科(Reoviridae)植物呼肠孤病毒属(Phytoreovirus)，由介体电光叶蝉(Recilia dorsalis)以持久增殖型方式传播，其基因组第12条片段编码的非结构蛋白(nonstructural protein, Pns12)是提供病毒复制和子代病毒粒体装配场所——病毒原质(viroplasm)的组分之一。为了明确Pns12在RGDV侵染介体电光叶蝉培养细胞中的功能，本研究通过原核表达的Pns12蛋白免疫注射兔(Oryctolagus cuniculus)，制备Pns12抗体，并应用免疫荧光标记和RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术研究Pns12在介体培养细胞内的定位和参与病毒原质形成的过程。共聚焦显微镜观察到，病毒侵染的细胞中，与荧光素交联的Pns12抗体特异地标记在病毒原质上。干扰Pns12蛋白表达后，可有效地阻碍病毒原质的形成、子代病毒粒体的组装和病毒非结构蛋白Pns12和外壳蛋白P8蛋白的表达，表明Pns12作为病毒原质的组分参与了RGDV在介体培养细胞内的复制。也表明，Pns12可作为理想的靶标用于阻断电光叶蝉携带和传播RGDV。