猪链球菌2型表面蛋白分支酸合成酶通过p38MAPK和NF-κB通路促进TLR4依赖的炎性反应

• 作者: 于君平 刘建涛 宋娅静 张安定 张强 金梅林 闫树仙
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪链球菌 分支酸合成酶 细胞因子 p38MAPK NF-κB TLR4
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1866-1873
• 页数: 8页
• 分类号: S852.61
• 字数: 5092字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.018

摘要

在大肠杆菌中表达与纯化猪链球菌表面蛋白分支酸合成酶,研究其对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞分泌细胞因子的影响,并试图解释其分子机制.以SC19基因组为模板,PCR扩增aroC基因,构建表达质粒,转化到BL21(DE3)中并诱导表达,所得融合蛋白主要以包涵体的形式存在,以8 mol·L-1尿素(含有50 mmol·L-1Tris,pH8.0)为变性剂,对构建于pET-28a(+)的猪链球菌aroC基因在大肠杆菌BL21中表达的包涵体进行变性、复性、纯化、去除LPS以及除菌.以aroC蛋白体外刺激RAW264.7细胞,共同孵育4h后用real-time PCR的方法分析IL-1β、TNF-α的mRNA转录量.用ERK1/2、JNK、NF-κB和P38的抑制剂以及TLR2和TLR4的特异性抗体来解释其引起炎性反应的分子基础.结果显示成功对aroC蛋白进行了变性、复性及纯化,该蛋白具有刺激巨噬细胞表达细胞因子的能力,用NF-κB的抑制剂以及TLR4的特异性抗体预处理细胞后能明显降低aroC导致的IL-1β、TNF-αmRNA的转录,用P38的抑制剂预处理细胞后能明显降低aroC导致的TNF-α mRNA的转录量.结果证明aroC在RAW264.7中通过p38MAPK和NF-κB通路促进TLR4依赖的炎性反应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金梅林	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	81	896	15.0	27.0
2	张强	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	12	102	5.0	10.0
3	张安定	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	13	81	5.0	8.0
4	刘建涛	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	1	5	1.0	1.0
5	宋娅静	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	1	5	1.0	1.0
6	闫树仙	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	1	5	1.0	1.0
7	于君平	华中农业大学农业微生物国家重点实验室	1	5	1.0	1.0