Survivin-ASODN对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的促进作用及其机制

• 作者: 孟德欣 方艳秋 李尧 李文 王伟群 赵文杰 陈玉强 齐亚灵
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 生存素 反义寡核苷酸 肝细胞癌 流式细胞术 转染
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 757-762
• 页数: 6页
• 分类号: R733
• 字数: 3330字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20140413

摘要

目的：应用反义寡核苷酸（ASODN）技术靶向抑制生存素（survivin）基因，研究其对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响，阐明 survivin反义寡核苷酸（survivin-ASODN）促进 SMMC-7721细胞凋亡的作用机制。方法：设计合成 survivin-ASODN 序列（FAM 荧光素标记）。利用脂质体介导法分别用浓度为100、200、300、400和600 nmol·L-1 survivin-ASODN转染 SMMC-7721细胞（ASODN转染组），并设空白对照组、空脂质体对照组和正义寡核苷酸（SODN）对照组。应用流式细胞术（FCM）检测不同浓度 survivin-ASODN体外转染 SMMC-7721细胞24、48和72 h 后 SMMC-7721细胞凋亡率及细胞周期；Western blotting 法检测survivin蛋白表达水平。结果：与各对照组比较，荧光素标记的 ASODN转染 SMMC-7721细胞24 h后，细胞生长开始受到抑制，细胞凋亡率增加，呈现剂量-时间依赖性（P＜0.05）；作用48 h后， ASODN 转染组细胞在G1期前出现明显的亚二倍体凋亡峰，G0/G1期细胞明显减少（P＜0.05），G2/M期细胞显著增加（P＜0.05），细胞被阻滞于 G2/M期。与各对照组比较，不同浓度 ASODN转染组 SMMC-7721细胞 survivin蛋白表达水平下降（P＜0.05），且随作用时间的延长而降低（P＜0.05）。结论：survivin-ASODN 通过抑制 survivin蛋白表达、改变细胞周期进程等机制促进 SMMC-7721细胞凋亡，并且呈现时间-剂量依赖性。