EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪圆环病毒2型方法的建立

• 作者: 吴海港 姜永厚 蔡晔 饶品彬
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 猪圆环病毒2型 EvaGreen 实时荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 75-80
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中的猪圆环病毒2型（PCV2）ORF4基因序列设计一对特异性引物，通过常规PCR扩增PCV2的ORF4基因，并将其纯化的PCR产物克隆入pMD18-T载体中，构建重组质粒。应用该重组质粒进行EvaGreen实时荧光定量PCR，建立了PCV2 DNA的标准曲线，并进行熔解曲线分析。结果显示：建立的EvaGreen实时荧光定量PCR特异性强，与其他非靶标病毒基因不发生交叉反应；灵敏度高，最高可检测到10拷贝/μL的病毒量；重复性好，3个浓度的批间和批内的变异系数均小于2.5%；对118份临床样品进行检测，阳性样品25份，阳性率为21.2%，检测结果与普通PCR相符率为99.2%，其中一份样品经荧光PCR检测为PCV2阳性，普通PCR检测为阴性。结果表明，建立的EvaGreen实时荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感度高、重复性好、简便快捷等特点，可用于临床PCV2感染的早期诊断以及分子流行病学调查。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜永厚	浙江理工大学生命科学学院	21	195	7.0	13.0
2	蔡晔	浙江理工大学生命科学学院	6	23	2.0	4.0
3	吴海港	浙江理工大学生命科学学院	5	10	2.0	3.0
4	饶品彬	浙江理工大学生命科学学院	5	10	2.0	3.0