人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定

• 作者: 安子扬 殷宏 王恺 田世民 邹明强
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 生长阻滞和DNA损伤诱生蛋白45 乳腺癌易感基因 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 52-55
• 页数: 4页
• 分类号: R114
• 字数: 2174字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2014.07.013

摘要

目的：为检测环境中可能存在的致癌物,建立生长阻滞和 DNA 损伤诱生蛋白45(GADD45α)双荧光素报告基因系统,构建新型人 GADD45α荧光素酶报告基因质粒。方法在 GADD45α基因启动子序列2.2 kb 及其后基因组 DNA 序列2.6 kb 范围内,设计3对引物进行搭桥 PCR,获得全长为4924 bp 的目的序列,插入 pGL4.10[luc2]质粒相应位点内。质粒构建成功后测定全长并进行酶切鉴定。结果正确扩增了全长为4.9 kb 的人 GADD45α基因片段,成功构建了人 GADD45α报告基因质粒(pGD2.2K-luc2)。结论在质粒设计中加入了存在 p53非依赖性 BRCA1结合位点的 GADD45α基因第1个内含子,构建成功的 pGD2.2K-luc2,为转染人源性细胞建立 GADD45α双荧光素报告基因系统打下了基础。