检测施马伦贝格病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法

• 作者: 冯春燕 吕继洲 吴绍强 张永宁 林祥梅 王彩霞 袁向芬 邓俊花
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 施马伦贝格病毒 核酸 引物 TaqMan探针 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1824-1829
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 3999字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.012

摘要

根据施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)S基因节段设计一对引物和TaqMan探针,建立了检测SBV核酸的荧光定量RT-PCR方法.通过优化反应体系和反应条件,该方法对101～107半数组织培养感染量(TCID50)的SBV核酸呈现良好的线性关系.利用德国FLI制备和保存的SBV核酸阳性(n=140)、SBV核酸阴性(n=132)和辛波血清群相关病毒核酸样品(n=16),对该方法的敏感性、特异性和重复性进行了验证.结果表明,所建立方法与FLI研制的SBV荧光定量RT-PCR具有相近的敏感性,两者对140份SBV核酸阳性样品的检测符合率达96.4％ (135/140);可灵敏地检测出1 TCID50的SBV RNA,并具有良好的重复性;除道格拉斯病毒(Douglasvirus)外,与辛波血清群相关病毒核酸无交叉反应.用该方法对采自内蒙古呼和浩特市某养殖场的绵羊血清(n=47)和澳大利亚进口绵羊血清(n=47)的RNA进行了检测,结果未发现SBV核酸阳性样品.SBV荧光定量RT-PCR检测方法的建立为应对施马伦贝格病提供了有效的检测手段.